Tinción de Gram
¿Qué es la tinción de Gram?
La tinción de Gram (también conocida como Gram stain o gramstain) es un método de coloración empleado para identificar bacterias. Esta herramienta de coloración se ha vuelto un método estándar en la práctica bacteriológica para diferenciar diferentes clases de bacterias, ya sea para distinguir bacterias gramnegativas y grampositivas.
¿Cómo se realiza la tinción de Gram?
- Paso 1: Prepárate todo lo necesario para realizar la tinción de Gram. Necesitas preparar un portaobjetos, pinzas de Schaeffer, hematoxilina, agua destilada, alcohol absoluto, cristal violeta, ácido acetico y la muestra a teñir.
- Paso 2: Coloca la muestra en el portaobjetos y fija la misma. Esto se hace realizando una mini-incisión en la superficie del portaobjetos con un escalpelo para evitar que la muestra se mueva de su lugar.
- Paso 3: Aplica cristal violeta en la muestra usando una pinza por uno o dos minutos. Esto se hará para teñir la muestra.
- Paso 4: Enjuaga con agua destilada para eliminar el cristal violeta que sobre.
- Paso 5: Aplica alcohol absoluto en la muestra, para quitar el color violeta de las células grampositivas, ya que son claramente visibles después de la tinción con alcohol absoluto.
- Paso 6: Enjuaga con agua destilada para quitar el alcohol absoluto.
- Paso 7: Aplica hematoxilina por uno o dos minutos para tinción de las células gramnegativas, que se mostrarán en color azul.
- Paso 8: Aclara con agua u ácido acético para eliminar el exceso de hematoxilina.
- Paso 9: Deja secar y analiza por microscopio.
Conclusiones
La tinción de Gram es una técnica muy útil para diagnosticar enfermedades bacterianas y para identificar diferentes tipos de bacterias. Esta técnica permite diferenciar claramente entre bacterias gramnegativas y grampositivas al permitirles que las bacterias retengan pigmentos para que sean visibles bajo un microscopio.
¿Qué es la tinción de Gram y cómo se realiza?
La tinción de Gram es una prueba que detecta bacterias en el lugar donde se sospecha una infección, como la garganta, los pulmones, los genitales o las lesiones en la piel. Las tinciones de Gram también se pueden usar para detectar bacterias en ciertos fluidos corporales, como la sangre o la orina. Se realiza con una muestra de la parte afectada, poníendola en un portaobjetos y añadiéndole unas gotas de tinte especial llamado tinte de Gram. Esto permite que algunas bacterias del interior de la célula queden teñidas de un color azul intenso, mientras que las bacterias que no contienen la sustancia permanecen incoloras. El patólogo luego observa físicamente la muestra bajo un microscopio para determinar el tipo de bacteria presente.
¿Cuáles son los pasos correctos de la tinción de Gram?
El procedimiento es sencillo, la muestra se coloca en una porta de cristal y se deja secar. Después de añade una sustancia para que quede pegada a la porta. A continuación se añade el primer colorante, llamado violeta de genciana. Se deja actuar, si las bacterias se tiñen adquirirán un color púrpura. Se lava con agua destilada y se añade el segundo colorante, el yodo. Se deja actuar y los microorganismos Gram-negativos adquieren un color amarillo mientras que los Gram-positivos mantienen el color púrpura, indicando que son Gram-positivos. Finalmente, se lavan nuevamente con agua destilada, se sequan con papel absorbente y se examinan al microscopio para identificar las bacterias Gram-positivas o Gram-negativas.
Los pasos respiratorios son:
1. Coloca la muestra en una porta de cristal.
2. Añade un adhesivo para que la muestra quede pegada a la porta.
3. Añade el primer colorante, el violeta de genciana.
4. Lava la muestra con agua destilada.
5. Añade el segundo colorante, el yodo.
6. Lava nuevamente con agua destilada.
7. Seca con papel absorbente.
8. Examina con microscopio para determinar si son Gram-positivas o Gram-negativas.
¿Cómo se realiza el proceso de tinción?
Tinción: Es el proceso por el cual las moléculas de un colorante se adsorben a una superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las células de los microorganismos y poder realizar la observación en microscopio óptico.
Pasos del proceso de tinción:
1. Obtención de la muestra: La muestra a examinar se obtiene a través de una muestra de agua de mar, suelo u orina. Se recomienda recolectar la muestra con equipo estériles y evitar la desecación.
2. Preparación de la muestra: Se debe moler la muestra para asegurar que el colorante se disuelva completamente.
3. Mezcla del colorante: Se debe mezclar el concentrado del colorante con una solución acuosa para llevar a cabo la tinción. Dependiendo del mecanismo de tinción, se agregan los reactivos químicos correspondientes.
4. Adición de colorante a la muestra: Una vez preparada la mezcla de colorante y agua, se aplica a la muestra, se incuba por un tiempo específico y se llena con una solución salina para equilibrar su pH.
5. Observación en microscopio óptico: La muestra se coloca en un portaobjetos, se monta en el microscopio óptico y se observa para corroborar que se ha logrado el objetivo deseado.